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這些測(cè)序方法，你知道嗎？

測(cè)序，測(cè)的是DNA的序列，也就是測(cè)定DNA中脫氧核糖核苷酸的排列順序，它是將DNA化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)橛?jì)算機(jī)可處理的數(shù)字信號(hào)的一個(gè)過(guò)程，我們能從這些經(jīng)過(guò)科學(xué)計(jì)算得出的數(shù)字信號(hào)中找尋到生命之間的奧秘。根據(jù)測(cè)序技術(shù)出現(xiàn)的時(shí)間以及讀長(zhǎng)、通量等特征，分為一代測(cè)序、二代測(cè)序、三代測(cè)序。下面的這些測(cè)序方法，你知道嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、一代測(cè)序一代測(cè)序技術(shù)，也被稱為Sanger測(cè)序。其利用了雙脫氧核苷酸會(huì)終止PCR的原理。比如：一條序列為ATCGCTA，我們進(jìn)行3次的雙脫氧核苷酸，第一次加...

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NGS測(cè)序之文庫(kù)構(gòu)建

由于二代測(cè)序讀長(zhǎng)的限制，不可能一下將一個(gè)很長(zhǎng)的基因序列測(cè)通，因此需要先將長(zhǎng)基因序列隨機(jī)片段化成小片段，這樣的話，這些片段就可以覆蓋整個(gè)基因組。所以需要構(gòu)建文庫(kù)。一、文庫(kù)構(gòu)建的步驟文庫(kù)構(gòu)建大致步驟類似，但是各有各自du特的點(diǎn)，例如，RNAseq里miRNA，lncRNA，mRNA方法各有差異，具體方法以后有機(jī)會(huì)再補(bǔ)充。這里以Illumina的PE文庫(kù)為例，其流程圖如下圖。二、文庫(kù)構(gòu)建詳細(xì)步驟（1）DNA片段化（FragmentDNA）使用超聲、酶或者加熱的方式將DNA樣品打碎成...

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NGS測(cè)序?yàn)槭裁葱枰膸?kù)構(gòu)建?

NGS即Next-generationsequencing，又叫第二代測(cè)序技術(shù)或者高通量測(cè)序技術(shù)或者下一代測(cè)序技術(shù)。文庫(kù)是DNA/RNA樣本在測(cè)序前做的一系列準(zhǔn)備，因?yàn)樵嫉暮怂針颖緹o(wú)法直接用于測(cè)序，只有經(jīng)過(guò)處理的樣本才能滿足測(cè)序平臺(tái)的要求，比如在DNA樣本兩端添加測(cè)序bi備的接頭；樣本量不足時(shí)，可以通過(guò)PCR擴(kuò)增達(dá)到上機(jī)的要求等。NGS測(cè)序?yàn)槭裁葱枰膸?kù)構(gòu)建?讓我們一起來(lái)看看吧！一、DNA文庫(kù)構(gòu)建的內(nèi)容（1）片段化及末端修復(fù)（2）加接頭（3）PCR注意：此處忽略磁珠純化的步...

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凍存細(xì)胞后續(xù)如何處理？

凍存細(xì)胞在收到貨后，后續(xù)如何進(jìn)行處理呢？如何復(fù)蘇呢？一文讓你了解清楚！一、收到凍存細(xì)胞如何處理收到凍存細(xì)胞后，請(qǐng)打開(kāi)包裝箱，檢查箱內(nèi)干冰是否充足，凍存管是否融化，若已經(jīng)融化，請(qǐng)拍照留存，并聯(lián)系客服，若無(wú)異常，請(qǐng)及時(shí)將凍存管置于超低溫冰箱內(nèi)保存，若長(zhǎng)時(shí)間不使用，必須在超低溫冰箱內(nèi)過(guò)夜后轉(zhuǎn)移至液氮中保存。二、凍存細(xì)胞如何復(fù)蘇取100mm培養(yǎng)皿并做好標(biāo)記，加入預(yù)熱好的12ml完quan培養(yǎng)基，將凍存管放入37℃水浴鍋中，輕輕搖晃凍存管，待細(xì)胞懸液完quan溶解后，轉(zhuǎn)移至安全柜中操作...

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細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染有哪些區(qū)別？

在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染是一項(xiàng)常用的技術(shù)，用于引入外源基因、表達(dá)蛋白或沉默目標(biāo)基因等。其中，細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染是兩種常見(jiàn)的轉(zhuǎn)染方式。細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染有哪些區(qū)別？讓我們一起來(lái)看看吧！類別特點(diǎn)適用范圍穩(wěn)定轉(zhuǎn)染長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)目標(biāo)基因長(zhǎng)期功能研究和穩(wěn)定表達(dá)需求的實(shí)驗(yàn)可通過(guò)篩選和擴(kuò)增獲得穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系長(zhǎng)期細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞系建立使用脂質(zhì)體、病毒載體或DNA轉(zhuǎn)染等方法大規(guī)模蛋白表達(dá)和基因敲入研究瞬時(shí)轉(zhuǎn)染快速實(shí)現(xiàn)臨時(shí)的基因表達(dá)短期功能研究和臨時(shí)表達(dá)需求的實(shí)驗(yàn)無(wú)需篩選和擴(kuò)增細(xì)胞系短期細(xì)...

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