技術(shù)文章
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熒光定量PCR(Real-timePCR),是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),通過對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。那么你知道熒光定量PCR的應(yīng)用嗎?讓我們一起來看看吧!一、分子生物學(xué)研究1.核酸定量分析:對傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測,比如近期流行的甲型H1N1流感,轉(zhuǎn)基因動植物基因拷貝數(shù)的檢測,RNAi基因失活率的檢測等。2.基因表達(dá)差異分析:比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差...
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細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常用技術(shù)。那么你知道細(xì)胞凍存的原理和實驗步驟嗎?讓我們一起來看看吧!原理:將細(xì)胞放在-196℃液氮中,可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài),減少細(xì)胞代謝,理論上儲存時間幾乎是無限的。最佳的冷凍條件是盡可能地降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成,減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷。上述要求可通過下列方法獲得:1.緩慢冷凍,使細(xì)胞內(nèi)水分離開細(xì)胞,但不可太慢,以避免冰晶形成;2.用親水的低溫保護(hù)劑排除水分;3.在盡可能低的溫度下保存細(xì)胞,降低高濃度鹽對冰中蛋白質(zhì)變性的...
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細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常用技術(shù)。原理是將細(xì)胞放在-196℃液氮中,可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài),減少細(xì)胞代謝,理論上儲存時間幾乎是無限的。那么細(xì)胞凍存有何注意事項呢?讓我們一起來看看吧!一、DMS0稀釋時會釋放大量熱量,不能直接加到細(xì)胞液中,須事先配制,且DMSO必須是細(xì)胞培養(yǎng)級別的;二、緩慢冷凍,細(xì)胞逐步脫水,不會因產(chǎn)生大的冰晶而受到損害;三、選擇細(xì)胞生長良好、密度約為80-90%、活力達(dá)90%以上的細(xì)胞凍存;四、凍存時細(xì)胞密度少于5X105個活細(xì)胞/mL時,很難成功復(fù)蘇;五、...
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PCR是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),PCR技術(shù)有很多,那么我們應(yīng)該如何區(qū)分各種PCR技術(shù)呢?讓我們一起來看看吧!一、普通PCRPCR是普通PCR,以雙鏈DNA為模板,以dNTP為底物,特異性地擴(kuò)增雙鏈DNA。然后采用瓊脂糖凝膠電泳對產(chǎn)物進(jìn)行檢測,只能做定性分析。二、實時熒光定量PCRqPCR和Real-timePCR是實時熒光定量PCR,以cDNA為模板,以dNTP為底物,對擴(kuò)增出的DNA進(jìn)行定量分析。實時熒光定量PCR常用的方法:水解探針法和熒光染料法...
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細(xì)胞培養(yǎng)做為生物學(xué)研究最基礎(chǔ)的技術(shù)之一,可以說是滲透科研界的方方面面。那么細(xì)胞實驗中的常見問題有哪些?應(yīng)該如何解決呢?讓我們一起來看看吧!一、如何選用細(xì)胞系培養(yǎng)基?優(yōu)先根據(jù)細(xì)胞來源公司提供的培養(yǎng)條件,。一般建議不要隨意更換培養(yǎng)基種類。細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用與原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基,可能造成細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化或無法存活,以及細(xì)胞的表型功能丟失。二、細(xì)胞發(fā)生微生物污染時,應(yīng)如何處理?直接丟棄或更換,將未受污染的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至其它培養(yǎng)箱,并用消毒劑消...
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