老师含着我的奶边摸边做,亚洲码国产精品高潮在线 ,性欧美videofree另类,亚洲熟妇AV一区二区三区浪潮

免費咨詢熱線:
資料下載
首頁 > 資料下載 > 分離純化蛋白質(zhì)內(nèi)序列分析用肽段的材料與步驟

分離純化蛋白質(zhì)內(nèi)序列分析用肽段的材料與步驟

 發(fā)布時間:2023/7/17 點擊量:1505

材料與儀器

材料與設備

考馬斯亮藍 G(0.05% 的乙酸-20% 甲醇溶液)

乙酸 (5% 10% 甲醇溶液)

甲醇 (50% 的水溶液和 10% 的水溶液)

SpeedVac 型旋轉濃縮器(Savant Instruments,Inc.)

Achromobacter 胰蛋白酶 I〔賴氨酰內(nèi)肽酶;50ng/ul 0.1mol/LTri-HCl(pH9.0)

Tween-200.1% 0.1mol/L Tris-HCl(pH9.0) 溶液〕

UltrafreeTM MC 濾器(22um;Millipore Corp.)

CF3COOH(TFA;0.1% 50% 乙腈溶液)

C18 反相 HPLC (2.1X250 mm;5um,300A)(VYDAC)

乙腈

2-丙醇

步驟


操作流程如下:

1) SDS-PAGE 分離待研究蛋白。

2) 凝膠用 0.05% 考馬斯亮藍 G 染色 15~30 min

3) 用含 5% 乙酸的 10% 甲醇溶液脫色。

4) 在水中浸泡 10 min。

5) 從凝膠上切下蛋白帶,轉移至微量離心管。切下一段不含蛋白質(zhì)的凝膠作對照。如必要,可將凝膠切成較小的碎片,使之能容易地沉入微量離心管的底 部。

6) 各管加入 1 ml 50% 甲醇。室溫下孵育 20 min。棄上清。

7) 各管加入1ml 10% 甲醇。室溫下孵育 20 min。棄上清。

8) 凝膠碎片在 SpeedVac 型旋轉濃縮器中干燥 2 min。

9) 各管加 10ul Achromobacter 蛋白酶 I

10) 各管加最小體積的含 0.1%Tween-20 0.1mol/L Tris-HCl(pH9.0)—剛夠淹沒凝膠碎片即可。
注:凝膠碎片會膨脹, 故重要的是要保證它們?nèi)阅苎蜎]在含去垢劑的緩沖液中。

11) 各管 30℃ 孵育 24 小時。

12) 各管在微量離心機中離心,將各管上清轉移至 22-um Ultrafree MC 濾器內(nèi)。12000r/min 離心 2 min。保留濾液。

13) 1 體積含 0.1%TFA 50% 乙腈溶液于各管留下的凝膠碎片中--足夠淹沒凝膠碎片。4°C 孵育 30 min。

14) 重復第 12、13 步操作。合并各樣品的濾液。

15) 樣品在 SpeedVac 型旋轉濃縮器中旋轉濃縮至體積小于 100 ml。加適量 HPLC 平衡液,制成供 HPLC 分析用的樣品。

16) 用反相 HPLC C18 柱分離消化液中的肽段。用含 0.09% TFA 的乙腈/2-丙醇 (3:1) 梯度洗脫肽段。于 214mn(對肽鍵)和 295nm(對色氨酸)檢測肽段的 UV 吸收。


北京百奧創(chuàng)新科技有限公司提供BioToolomics蛋白質(zhì)內(nèi)序列分析用純化肽段產(chǎn),更多有關蛋白質(zhì)內(nèi)序列分析用純化肽段產(chǎn)品及資料,請聯(lián)系百奧創(chuàng)新客服!

文件下載    圖片下載    
年轻 娇小 亚洲人 日本语 夹| 年轻教师6电影完整版| 妽妽的下边好紧春雨医生| 国产chinese男男gay片| 被拖进小树林C了好爽H| 久久久精品人妻一区二区三区四 | japanese日本丰满少妇| 亚洲欧美一区二区三区| 337P日本欧洲亚洲大胆精品| 成熟YIN荡美妞A片视频麻豆| 欧美熟妇dodk巨大| 精品久久久一区二区三区| 高柳の肉嫁动漫在线观看| 国产精品素颜系列| 日韩亚洲变态另类中文| 爱我久久免费观看高清| 天堂www中文在线资源| 国产精品打着电话偷着情| 亚洲欧美自偷自拍另类视| 日本护士野外XXXHD| 99久久人妻精品免费一区| 国产精品沙发午睡系列| 亚洲日韩国产一区二区三区| 亚洲熟妇无码八AV在线播放| 日韩精品无码AV中文无码版 | 亚洲国产精品成人无码A片软件| 精灵梦叶罗丽第八季| 日本丰满白嫩BBWBBW| 国产全肉乱妇杂乱视频| 无码精品a∨在线观看十八禁 | 被两个按摩师用春药按摩| 欧美老妇大p毛茸茸| 国产精品99久久免费观看| A级毛片在线观看| 亚洲区色情区激情区电影| 大胆欧美人体艺术| 高清VPSWINDOWS另类乱| 国产SUV排行榜前十名| 爽欲亲伦96部分| 欧美最猛黑人XXXX黑人猛交| 调教室捆绑白丝JK震动捧娇喘|