老师含着我的奶边摸边做,亚洲码国产精品高潮在线 ,性欧美videofree另类,亚洲熟妇AV一区二区三区浪潮

免費(fèi)咨詢(xún)熱線:
資料下載
首頁(yè) > 資料下載 > Protein A/G 親和層析法純化單克隆抗體原理、步驟及注意事項(xiàng)

Protein A/G 親和層析法純化單克隆抗體原理、步驟及注意事項(xiàng)

 發(fā)布時(shí)間:2023/7/11 點(diǎn)擊量:2236

簡(jiǎn)介

目前約 70~ 80% 的抗體純化使用 Protein A/G 親和層析法。Protein A IgG 的結(jié)合強(qiáng)度很大程度上依賴(lài)于該抗體的種屬和亞類(lèi),而 Protein G 對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物的 IgG 則有著更高的親和力,因此,Protein G 可用于純化不能與 Protein A 很好結(jié)合的哺乳動(dòng)物單抗或多抗 IgG 的純化。

原理

Protein A/G 親和層析法純化單克隆抗體的基本原理是 Protein A/G 能特異性地與抗體的 Fc 段結(jié)合,因此 Protein A/G 親和層析柱可用于抗體(單抗和多抗)的分離純化,具有很高的選擇性。經(jīng)過(guò)一步親和層析,即可從腹水、雜交瘤培養(yǎng)上清或免疫血清等樣品中得到高純度(> 95%)的抗體。

材料與儀器

器材:

Protein A/G 親和層析柱,FPLC 層析系統(tǒng)


試劑:

上樣緩沖液:0.02 mol/L PBS,pH 7.4

洗脫液:pH 3.0~4.0、0.02 mol/L 檸檬酸緩沖液或 pH 3.0、0.2 mol/L 甘氨酸 -HCL 緩沖液

再生液:0.1 mol/L 乙酸

步驟

Protein A/G 親和層析法純化單克隆抗體的基本過(guò)程可分為如下幾步:


A. 樣品預(yù)處理:小鼠腹水于 4 ℃12000 r/min 離心 15 分鐘,以除去較大的凝塊。經(jīng)上樣緩沖液倍比稀釋后,0.45 μm 濾膜過(guò)濾。

B. 平衡:以 1 mL/min 的流速,用 5-10 倍層析柱體積的上樣緩沖液平衡層析柱,至流出液 pH 值為 7.4。

C. 上樣:預(yù)處理過(guò)的腹水上層析柱,保持 1 mL/min 流速,繼續(xù)用上樣緩沖液流洗 510 倍層析柱體積至基線穩(wěn)定(即雜蛋白wan全洗脫)。


D. 洗脫:用洗脫液洗脫柱結(jié)合抗體,同時(shí)應(yīng)用 FPLC 層析系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),當(dāng)觀察到基線開(kāi)始上升,即出現(xiàn)洗脫峰時(shí),每管 3 mL 收集流出液,直至洗脫峰回到基線,并立即用 1.0 mol/L pH 9.0 Tris-HCL 緩液調(diào)整收集的各管流出液 pH 值至 7.0。


E. 再生:保持 1 mL/min 流速,用 35 倍層析柱體積的再生液淋洗柱子。


F. 平衡:繼續(xù)用 510 倍層析柱體積的上樣緩沖液重新平衡層析柱,至流出液的 pH 呈中性,再用 10 倍層析柱體積的三蒸水平衡,可重復(fù)使用。
G. 濃縮:合并調(diào)至中性的各管洗脫液,采用超濾離心管進(jìn)行濃縮,最后以 0.15 mol/L PBSpH 7.4)調(diào)整到合適體積,進(jìn)行 SDS-PAGE 鑒定純度,BCA 法進(jìn)行抗體定量,分裝凍存。

注意事項(xiàng)

1. 純化前所有緩沖液、樣品及層析柱都必須平衡至室溫,以避免產(chǎn)生氣泡。


2. 純化前樣品、緩沖液須用 0.45 μm 濾膜過(guò)濾去除顆粒性物質(zhì),以防層析柱被堵塞而降低純化效果。


3. 使用經(jīng)飽和硫酸銨粗純的樣品不僅可獲得更好的純化效果,還可適當(dāng)延長(zhǎng)親和層析柱的使用壽命。


4. 加樣后,讓樣品在親和柱內(nèi)滯留一定時(shí)間(約 30 分鐘)可提高親和柱的純化效率。


5. 在酸性條件下洗脫的抗體必須立即中和到中性(pH 7.0 左右),以利于維持抗體的生物學(xué)活性,避免抗體失活。


6. 在使用和保存層析柱時(shí),應(yīng)避免柱內(nèi)液體流干,以防氣泡進(jìn)入。


7. 為確保層析柱的使用壽命和載量,及時(shí)清洗非常重要,清洗完成后用上樣緩沖液重新平衡。


8. 層析柱可于 4 ℃、20% 乙醇中長(zhǎng)期保存。

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司提供BioToolomics Protein A/G 親和層析法純化的單克隆抗體產(chǎn),更多有關(guān)Protein A/G 親和層析法純化的單克隆抗體產(chǎn)品及資料,請(qǐng)聯(lián)系百奧創(chuàng)新客服!


文件下載    圖片下載    
久久久综合香蕉尹人综合网| 免费精品无码AV片在线观看| 医生边走边吮男男H| 亚洲国产精品国自产拍AV| 中文字幕乱码在线人视频| 青青草97国产精品免费观看 | 日本SM/羞辱/调教/捆绑视频| 灯草和尚在线观看| 国产午夜福利100集发布| 老师含紧一点H边做边走视频| 色狠狠色噜噜AV天堂五区| 精品国产黑色丝袜高跟鞋| 女人18毛片A级毛片免费视频| 无码中文人妻在线一区二区三区 | 欧美精品毛片久久久久久久| 丰满岳乱妇在线观看| 迎合疯狂肉伦耕耘播种| 又大又粗欧美黑人AAAAA片| 欧美 丝袜 自拍 制服 另类| 性色AV无码久久一区二区三区| 呦系列视频一区二区三区| 我们的日子电视剧免费观看完整版 | 国产精品人妻久久久久| 国产永久免费CRM系统| 国产精品天天看天天做夜夜爽| 精品国产制服丝袜高跟| 小雪被老汉各种姿势玩| 国产精品黄黄久久久免费看| 少妇久久久久久久久久| 亚洲AV无码AV吞精久久| 含羞草国产亚洲精品岁国产精品 | 最新毛片婷婷99精品视频| 少妇偷人对白又粗又大视频| 国产精品久久一区二区三区| 欧美在线观看| 亚洲精品无码成人| 性色AV浪潮AV蜜桃AV| 欧美三日本三级少妇三级久久| 丰满少妇被猛烈进入a片 | 日本VA欧美VA欧美VA精品| 国产精品乱码一区二三区|