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生物發(fā)光實驗

 更新時間:2024-09-25 點擊量:332

生物發(fā)光實驗

1.確定螢光素酶

常見的熒光素酶包括螢火蟲熒光素酶Firefly luciferase,Fluc、海洋蛋白質熒光素酶(Renilla luciferase,Rluc)和高司氏熒光素酶。它們在特定條件下都能催化各自的底物產(chǎn)生相應的光,而無需外部激發(fā)器。其中,Fluc是應用最為廣泛的熒光素酶。

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2.構建穩(wěn)轉螢光素酶細胞株

穩(wěn)轉株即穩(wěn)定表達細胞株,指的是基于某一細胞系構建的持續(xù)過表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應用的穩(wěn)轉株構建方法,具有高效整合、目標細胞廣泛等特點。

3.驗證穩(wěn)轉株

構建得到穩(wěn)轉株后,可以進行體外實驗以驗證Fluc穩(wěn)轉株效果??梢詫⑸L良好的Fluc細胞消化,隨后用培養(yǎng)基稀釋成系列梯度濃度并分別接種于96孔板中,每孔100 μL,每個濃度設置三平行孔。

4.穩(wěn)轉株注射動物

成功構建穩(wěn)轉株后,即可進行動物移植模型構建。

5. 注射底物

注射的細胞一般會在2-3周成瘤(具體時間根據(jù)細胞種類,接種數(shù)量,細胞活力會有所不同),可以根據(jù)實驗設計進行一定處理。

6.活體成像

活體成像建議直接使用帶有麻醉裝置的小動物活體成像儀,這樣操作更方便,而且可以更準確的控制小鼠麻醉的情況。如儀器不帶麻醉裝置,也可自行麻醉小鼠后置于小動物活體成像儀中進行成像。檢測途中要注意防止小鼠中途蘇醒而離開成像臺。

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