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細(xì)胞復(fù)蘇的小Tips

 更新時(shí)間:2024-09-23 點(diǎn)擊量:501

一、細(xì)胞復(fù)蘇的原理

細(xì)胞復(fù)蘇的原理是基于將細(xì)胞從液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢復(fù)活力的技術(shù)。遵循快融"原則,短時(shí)間內(nèi)融化胞外結(jié)晶,避免緩慢融化導(dǎo)致水分滲入胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶損傷細(xì)胞,融化越快,細(xì)胞損傷越小。

二、細(xì)胞復(fù)蘇的小Tips

1. 為防止凍存管在水浴鍋中升溫時(shí)突然爆炸,可以在放入水浴鍋前先在生物安全柜中把蓋子擰松一下然后再擰上。

2. 從液氮罐里拿出細(xì)胞不必急于放入水浴鍋中,因?yàn)榧?xì)胞從液氮的-196℃上升到-80℃這個(gè)過(guò)程對(duì)細(xì)胞是沒(méi)有損害的,我們有足夠的時(shí)間處理。但是,一旦細(xì)胞融化,應(yīng)立即將其轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備的培養(yǎng)基中,以稀釋細(xì)胞凍存液中的DMSO,因?yàn)樵诔叵赂邼舛?/span>DMSO對(duì)細(xì)胞的損害較大。

3. 解凍細(xì)胞時(shí)不必等待細(xì)胞完quan融化才從水浴鍋中取出,當(dāng)觀察到冰塊浮起來(lái)即可。此外,水浴時(shí)間應(yīng)盡量不超過(guò)1分鐘,整個(gè)解凍過(guò)程盡量在3分鐘內(nèi)完成

4. 將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中時(shí),應(yīng)確保操作迅速并避免污染。通過(guò)這些注意事項(xiàng)和技巧的應(yīng)用,可以有效地提高細(xì)胞復(fù)蘇的成功率和細(xì)胞的活力。我們首先將已經(jīng)融化的部分轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的離心管中。接著,從離心管中吸取少量的培養(yǎng)基到凍存管中。這時(shí),剩余的冰塊會(huì)迅速融化。然后,我們將這些融化后的液體全部轉(zhuǎn)移回離心管,進(jìn)行離心,以去除上清液(這樣做是為了去除DMSO)。之后,我們加入新鮮的培養(yǎng)基,輕輕搖晃,使其混合均勻,然后接種到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞復(fù)蘇后,對(duì)于貼壁細(xì)胞,復(fù)蘇24小時(shí)后,我們會(huì)在顯微鏡下觀察。如果細(xì)胞的密度達(dá)到了80%,那么就可以進(jìn)行正常的傳代培養(yǎng)。如果密度還沒(méi)有達(dá)到80%,那么我們就會(huì)繼續(xù)培養(yǎng),直到48小時(shí)后再進(jìn)行換液。

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