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石蠟切片Protocol實驗需要注意哪些要點呢?

 更新時間:2024-05-16 點擊量:648

石蠟切片是一種常見的組織學技術,用于觀察組織的微觀結構。在進行石蠟切片實驗時,有許多細節(jié)需要注意,這些細節(jié)往往決定了切片的質量和結果的準確性。那么石蠟切片Protocol實驗需要注意哪些要點呢?本期內容將為你揭示一些關鍵的細節(jié),助你獲得最佳的石蠟切片效果。

1. 組織固定

1)取新鮮組織,分割塊的大小,宜小不宜大,一般不超過1cm3,用預冷的PBS沖洗,置于10%的福爾馬林固定液中固定24小時。

2)取出組織,蒸餾水沖洗30分鐘。

2. 組織脫水,包埋,切片

1)自動脫水:設定脫水程序,70%酒精30min----80%酒精2小時----95%酒精2小時----95%酒精2小時----100%酒精2小時----100%酒精2小時。脫水的目的是除去組織中的水分,便于透明、浸蠟、包埋等步驟的進行,因為這些程序中所用的藥品都不能與水混合,所以必須脫水。常用的脫水劑為酒精。脫水過程應緩慢進行,不能操之過急或時間過長,以免組織變硬變脆或發(fā)生收縮現(xiàn)象。

2)透明: 二甲苯, 30min/次,2次。透明的目的是將脫水劑從材料中除去,使材料透明,增記折光系數(shù);同時便于下步的浸蠟和包埋等程序(因為酒精不能溶解石蠟)。透明劑是一種既能與脫水劑混合,又能與包埋劑混合的藥劑。常用的透明劑為二甲苯和氯仿,適用原則也是逐級進行,可減少材料收縮。

3)浸蠟組織經(jīng)透明后放入熔化的石蠟(熔點為52℃)內,1小時/次,3次。浸蠟的目的是逐漸除去透明劑,并為包埋劑所代替。常用的包埋劑是石蠟。浸蠟過程是使石蠟慢慢溶于浸有材料的透明劑中,溶解在透明劑中的石蠟漸漸深入到材料的細胞中去,最后使透明劑wan全被石蠟取代,以便切片。浸蠟過程一般是從低溫到高溫、從低熔點到高熔點逐漸進行,這一過程不能操之過急,否則浸蠟不che底影響切片。此外,軟材料可用熔點較低石蠟,較硬的材料可用熔點較高的石蠟;冬季可用熔點較低的石蠟,夏季可用熔點較高的石蠟。石蠟必須純凈,不含雜質。整個浸蠟過程需在恒溫箱內進行。

4)包埋:將熔化的石蠟倒入包埋框再將組織塊放入,放入時不能有氣泡,冷卻臺上冷卻30分鐘。注意將樣品編號封于蠟塊上,以免樣品混淆。

 

image.png 

 

5)常規(guī)石蠟切片:厚度6um,連續(xù)切片。

 

6)石蠟切片脫水60℃烤片30min,可室溫保存。

以上就是有關于石蠟切片Protocol實驗需要注意哪些要點的問題解答,如果你想要了解更多,請咨詢百奧創(chuàng)新客服!


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