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三一造血人間充質(zhì)干細胞高效擴增試劑盒(CT-021)現(xiàn)貨供應(yīng)

 更新時間:2024-03-12 點擊量:677

產(chǎn)品簡介:

三一造血人間充質(zhì)干細胞高效擴增試劑盒(CT-021)適用于在體外培養(yǎng)人臍帶、脂肪、牙髓等多種組織來源的間充質(zhì)干細胞。

產(chǎn)品特點:

· 無異源成份

· 細胞可穩(wěn)定傳代至第16代

· 無菌,無支原體,低內(nèi)毒素

· 可支持人臍帶,脂肪,牙髓,骨髓,胎盤來源間充質(zhì)干細胞的快速增殖

保存條件:

人間充質(zhì)干細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基與培養(yǎng)基添加劑 B 需 2-8°C 避光保存,有效期為 12 個月;培養(yǎng)基添加劑 A 需-20°C 保存,有效期 24 個月;

配制成的wan全培養(yǎng)基可于 2-8°C 條件下存放 4 周;

使用方法:

一、人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基的配制:

1. 于實驗開始時前一天,將培養(yǎng)基添加劑 A 從-20°C 冰箱中取出,置于 4°C 冰箱中直至wan全溶解;

2.在將培養(yǎng)基瓶拿進超凈臺之前,用 75%酒精對其表面進行消毒;

3.將培養(yǎng)基添加劑 A 和 B 加入到人間充質(zhì)干細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中;

4.吸取基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗滌瓶身內(nèi)壁,并重復操作一次,盡可能使培養(yǎng)基添加劑全部加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中;

5.輕輕搖晃基礎(chǔ)培養(yǎng)基瓶身,使各成分混合均勻,搖晃時,請避免氣泡產(chǎn)生。將配制好的人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基置于2-8°C 保存。

二、人間充質(zhì)干細胞的復蘇:

1.準備好 37°C 水??;

2.超凈臺中,取5mL 人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基于 T25 瓶中,并將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育30min;

3.超凈臺中,取10mL人間充質(zhì)干細胞wan全培養(yǎng)基于15mL離心管中,待用;

4.從液氮中取出凍存的人間充質(zhì)干細胞,置于-80°C冰箱中揮發(fā)管中液氮,而后迅速將凍存管置于

37°C 溫水中,并快速晃動凍存管,使其內(nèi)含物盡快融化,待凍存管內(nèi)含物融化wan全后取出;

5.在將凍存管拿進超凈臺之前,用 75%酒精對其表面進行消毒;

6.輕輕重懸細胞,并將其移入待用的裝有 10mL 人間充質(zhì)干細胞wan全培養(yǎng)基的 15mL 離心管里;

7.用 1mL 培養(yǎng)基再次沖洗凍存管,并將此懸液移至離心管中,輕輕吹打混勻;

8.室溫下,300g 離心 10min;

9.傾去上清,往沉淀加入 2-3mL 的人間充質(zhì)干細胞wan全培養(yǎng)基,輕輕吸打均勻;

10.從細胞培養(yǎng)箱中取出已預(yù)先孵育 30min 的 T25 瓶,吸去培養(yǎng)瓶中的液體;

11.將細胞按 0.8-1.0×104 個活細胞/cm2 的密度接種到 T25 瓶中,并加入足量的人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶,使細胞分布均勻;

12.將細胞置于 37°C,5% CO2 的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

13.第二天,更換新鮮的人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基;

14.每隔兩天更換一次新鮮的培養(yǎng)基,直至細胞生長至 80-90%的匯合度。

三、人間充質(zhì)干細胞的傳代:

1.將 PBS,胰酶置于 37°C 水浴鍋中預(yù)熱;

2.超凈臺中,吸去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液;

3.輕輕加入5mL PBS于T25 瓶中,輕輕晃動洗滌細胞后吸去PBS,共洗滌兩次;

4.加入 2mL 濃度為 0.05%的胰酶,輕輕晃動,使胰酶溶液均勻覆蓋培養(yǎng)瓶底面。顯微鏡下,當70-80%的細胞變圓時輕拍培養(yǎng)瓶,并立即加入10mL人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基進行中和。輕輕吸取瓶內(nèi)液體反復沖洗瓶底,使細胞wan全脫落;

注意:建議使用濃度為 0.05%的胰酶,并且消化時間不宜過長,以減少胰酶對干細胞的損傷。

5.將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15mL離心管中,300g離心10min;

6.小心去除上清,而后加入10mLPBS重懸細胞沉淀,并再300g離心10min;

7.小心去除上清,加入2-3mL人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基重懸細胞沉淀,按1:2或1:3的比例接種到新的T25瓶中,再次加入足量的wan全培養(yǎng)基,輕輕晃動培養(yǎng)瓶,使細胞分布均勻;

8.將細胞置于 37°C,5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

產(chǎn)品選購:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

CT-004

人γδT細胞高效擴增試劑盒

2L/

 


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