邁迪安推出的Air-Dryable™ 可風干尿液直擴qPCR/RT- qPCR預混液是專門為直接從高濃度尿液中快速靈敏地擴增DNA/RNA設計的抗抑性配方,其高靈敏度甚至可以檢測出通常需要驗血才能檢測到的蟲媒病毒,如基孔肯雅病毒。在使用時只需要將引物和探針添加到可風干預混液中,再分裝到反應容器中(例如:PCR管)進行干燥即可。檢測時,只需要將患者尿液樣本直接加入干燥后的預混液中,無需核酸提取即可進行檢測。
Air-Dryable™ 可風干尿液直擴 qPCR /RT-qPCR 預混液是不含甘油、含有優(yōu)化的風干賦形劑、可兼容風干的核酸檢測試劑,是專門針對尿液樣本直接擴增設計的配方,可通過風干建立常溫穩(wěn)定型qPCR/RT-qPCR檢,適用于從尿液樣本免核酸提取的DNA 和RNA直接擴增??芍苯訖z測尿液樣本中低濃度細菌和無細胞核酸,適用于單重或多重檢測,還可兼容不同風干條件。
分別使用風干后的可風干尿液直擴qPCR預混液(紅色)、KAPA Probe Force(Roche, 綠色)和Ultraplex™(QuantBio,灰色)對25%人體尿液樣本中的淋病奈瑟菌、沙眼衣原體和B族鏈球菌(GBS)靶標進行三重擴增。 結果顯示,與對比試劑相比,干燥后的可風干尿液直擴qPCR預混液對25%人體尿液樣本具有更高效的多重擴增和靈敏度。
更快速獲得測試結果
A)分別使用標準擴增循環(huán)和快速擴增循環(huán)對25%人體尿液樣本中的淋病奈瑟菌、沙眼衣原體和B族鏈球菌(GBS)靶標進行三重擴增。標準循環(huán):95°C5分鐘,95°C10秒,60°C30秒,40個循環(huán);快速循環(huán):95°C3分鐘,95°C1秒,60°C1秒,40個循環(huán)。
B)分別使用標準擴增循環(huán)和快速擴增循環(huán)對5%人體尿液樣本中的3個哺乳動物RNA靶標進行三重擴增。標準循環(huán):逆轉錄10分鐘,95°C10秒,60°C10秒,40個循環(huán);快速循環(huán):逆轉錄5分鐘,95°C1秒,@60°C1秒,40個循環(huán)。所有反應在Quantstudio™7FlexReal-TimePCR儀上進行。結果顯示,可風干尿液直擴qPCR/RT-qPCR預混液可在最快速反應條件中給出快速優(yōu)異的擴增結果,并且靈敏度和重現(xiàn)性均不受影響。
將可風干尿液直擴qPCR/RT-qPCR預混液干燥后進行加速熱穩(wěn)定性實驗。試劑干燥后(紅色)在 37C 保存1個月,與新鮮液體試劑(黑色)對比,樣本為30%人體尿液。結果表明,經過加速穩(wěn)定性測試,風干混合物在環(huán)境溫度下保持了充分的活性,預計穩(wěn)定性大于12個月。
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