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【轉(zhuǎn)染小課堂】帶你了解轉(zhuǎn)染的奧妙和神奇!

 更新時間:2024-04-08 點(diǎn)擊量:995

轉(zhuǎn)染(Transfection):是真核細(xì)胞主動或被動導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

原理:將DNA導(dǎo)入細(xì)胞使得它可利用細(xì)胞自身的細(xì)胞機(jī)制表達(dá)和合成蛋白質(zhì),將RNA導(dǎo)入細(xì)胞則是用來通過終止翻譯來降低某特定蛋白的合成。

轉(zhuǎn)染的RNA在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)揮作用,DNA則需被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核中從而達(dá)到有效的轉(zhuǎn)染。在核內(nèi),DNA會被短暫表達(dá)或整合到基因組DNA而將該遺傳改變傳代到下一代細(xì)胞。

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轉(zhuǎn)染類型:

瞬時轉(zhuǎn)染:外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此,一個宿主細(xì)胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析,在轉(zhuǎn)染后24-96h內(nèi)分析結(jié)果。一般來說,超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)(依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可以作為一種游離體整合到宿主細(xì)胞中。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合,通常需要通過一些選擇性標(biāo)記,如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復(fù)篩選,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。

轉(zhuǎn)染方式:

正向轉(zhuǎn)染:細(xì)胞培養(yǎng)板中先加入細(xì)胞然后再加入轉(zhuǎn)染復(fù)合物的方法。例如:DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、脂質(zhì)體介導(dǎo)法、非脂質(zhì)體的脂質(zhì)活化的樹枝狀分子介導(dǎo)法、病毒介導(dǎo)法等。

反向轉(zhuǎn)染:核酸和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物先加入到孔板中,然后再向小孔中加入細(xì)胞。例如:顯微注射、電穿孔、基因槍等。

化學(xué)方法:使用載體分子中和或使帶負(fù)電荷的核酸帶正電荷,包括DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、非脂質(zhì)體脂質(zhì)分子介導(dǎo)法、陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、通過其他陽離子聚合物(如聚乙烯,PEI,活化的樹枝狀分子介導(dǎo)法)。

生物方法:依靠病毒包裝將非病毒基因轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中的方法(也稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)),包括病毒介導(dǎo)法。

物理方法:將核酸直接遞送到細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中,包括顯微注射、電穿孔、基因槍。

轉(zhuǎn)染影響因素:

核酸類型:質(zhì)粒DNA,mRNAsiRNA,miRNAmimicinhibitors...

細(xì)胞密度:一般來說,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60%~80%時進(jìn)行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率,過低或過高都會影響轉(zhuǎn)染效果。

細(xì)胞類型:如原代細(xì)胞、貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞等。

細(xì)胞系的健康程度和存活力

轉(zhuǎn)染試劑類型:脂質(zhì)體、非脂質(zhì)體的脂質(zhì)和活化的樹枝狀分子。

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司提供多種形式和規(guī)格的轉(zhuǎn)染試劑,供您選擇:

一、PEI轉(zhuǎn)染試劑

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品牌產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱規(guī)格

Serochem

PRIME-P100-100MG

PRIME-P100-1G

PEI Prime? 粉末,轉(zhuǎn)染級線性聚乙烯亞胺100mg/1g
Prime-AQ100-5ML
Prime-AQ100-100ML
PEI Prime? AQ 1 mg/mL 液體轉(zhuǎn)染試劑5mL/100mL
Polysciences24765-1
24765-100
PEI MAX® - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)100mg/1g
23966-1
23966-100
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K)100mg/1g
Polyplus114-15jetPRIME Transfection Reagent0.1 mL



二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑

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品牌產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱規(guī)格
Polyplus101000122in vivo-jetRNA®+ transfection reagent1 mL
ThermoFisher11668019Lipofectamine2000 transfection reagent1.5 mL
L3000015Lipofectamine3000 transfection reagent1.5 mL


三、RNAi轉(zhuǎn)染試劑

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品牌產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱規(guī)格
多納DN001- 01CALNPRNAi in vitroB0.1 mL;A0.5 mL
DN001- 05B0.5 mL;A1 mL x 2
DN001- 10B1.0 mL;A1 mL x 4







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