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PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的使用可有什么要領(lǐng)

 更新時(shí)間:2022-07-20 點(diǎn)擊量:1235
 
  PEI線性轉(zhuǎn)染試劑是由一種陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,分子量40000,它能與核酸形成復(fù)合物,并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適。該試劑可在含血清與抗生素的*培養(yǎng)基中發(fā)揮作用,即使在有血清存在的情況下,它仍然能高效的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單,對(duì)大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞都有較高的轉(zhuǎn)染效率(用于常見(jiàn)細(xì)胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等),并且細(xì)胞毒性較低。
  PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的注意事項(xiàng):
  1、質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高純度無(wú)內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度。如有可能,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。
  2、細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保細(xì)胞沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。
  3、細(xì)胞培養(yǎng)液要求:PEI線性轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。確保細(xì)胞培養(yǎng)液沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)液中不添加抗生素。
  4、DNA濃度和PEI轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化:DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響,初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到大的轉(zhuǎn)染效率。使用者可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例,通常推薦是1:2~1:5。
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