老师含着我的奶边摸边做,亚洲码国产精品高潮在线 ,性欧美videofree另类,亚洲熟妇AV一区二区三区浪潮

免費(fèi)咨詢熱線:
技術(shù)文章
首頁 > 技術(shù)中心 > 轉(zhuǎn)染技術(shù)要點(diǎn)

轉(zhuǎn)染技術(shù)要點(diǎn)

 更新時(shí)間:2022-05-23 點(diǎn)擊量:1287
  1. 細(xì)胞培養(yǎng)物 健康的細(xì)胞培養(yǎng)物是成功轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)。不同細(xì)胞有不同的培養(yǎng)基,血清和添加物。低的細(xì)胞代數(shù)(<50)能確?;蛐筒蛔?。高的轉(zhuǎn)染效率需要一定的細(xì)胞密度,一般的轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)有專門的說明。推薦在轉(zhuǎn)染前24小時(shí)分細(xì)胞,這將提供正常細(xì)胞代謝,增加對(duì)外源DNA攝入的可能。一定要避免細(xì)菌,支原體或真菌的污染。
 
  2. 血清大多數(shù)培養(yǎng)基在使用前需要加血清。胎牛血清(FCS)經(jīng)常用到,便宜一點(diǎn)的有馬或牛血清。通常的,血清是一種包含生長(zhǎng)因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物,對(duì)不同細(xì)胞的生長(zhǎng)作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響轉(zhuǎn)染效率。因此在轉(zhuǎn)染前建議先測(cè)(轉(zhuǎn)右) 試出對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)良好的血清批號(hào),轉(zhuǎn)染時(shí)用同一批號(hào)的血清,并同時(shí)做負(fù)對(duì)照(不加轉(zhuǎn)染試劑及外源DNA)以測(cè)試細(xì)胞生長(zhǎng)是否正常。有些轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在情況下效率很低,因此在轉(zhuǎn)染前要除血清。但有些對(duì)此敏感的細(xì)胞如原代細(xì)胞會(huì)受到損傷,甚至死亡導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率極低。
 
  3. 載體構(gòu)建 轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建(病毒載體,質(zhì)粒DNA,RNA,PCR產(chǎn)物,寡核苷酸等)也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對(duì)特定宿主細(xì)胞感染效率較高,但不同病毒載體有其特定的宿主,有的還要求特定的細(xì)胞周期,如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細(xì)胞,此外還需考慮一些安全問題(如基因污染)。除載體構(gòu)建外,載體的形態(tài)及大小對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響,如前面提到的超螺旋及線性DNA對(duì)瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有毒性作用,轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行,因此選擇組成或可調(diào)控,強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要,同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對(duì)照可排除毒性影響的干擾。
 
  4. DNA質(zhì)量 DNA質(zhì)量對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)(如脂質(zhì)體等)基于電荷吸引原理,如果DNA不純,如帶少量的鹽離子,蛋白,代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。核酸純化**品牌德國QIAGEN公司提供的超純質(zhì)粒抽提試劑盒,能達(dá)到兩倍2x CsCl梯度離心以上的純度效果,使您不必為DNA質(zhì)量操心。此外,對(duì)一些內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞(如原代細(xì)胞,懸浮細(xì)胞和造血細(xì)胞),QIAGEN還提供可去除內(nèi)毒素污染的質(zhì)粒抽提試劑盒,在質(zhì)粒抽提過程中有效去除脂多糖分子,保證理想的轉(zhuǎn)染效果。
 
  5.轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大,許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例,細(xì)胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測(cè)時(shí)間等。
亚洲精品久久久久久久久久久| 一出一进一爽一粗一大视频| 国产精品成人一区二区三区无码| 亚洲精品国产成人| 中文字幕一区二区三区久久网站| 久久久噜噜噜久久中文字幕色伊伊| 好姐妹高清在线韩国电影观看| 欧美freese黑又粗又大| 性xxxfreexxxx国产| 欧美精品大香伊蕉在人线| 年轻护士的滋味中文字幕| 久久国产精品亚洲婷婷A片| 天天躁日日躁狠狠躁欧美老妇小说| 无码人妻AV一区二区三区蜜臀| 久久久受WWW免费人成| 欧美mv日韩mv国产网站| 国产AV一区二区三区日韩| 无码专区HEYZO色欲AV| 精品丝袜人妻久久久久久| 男澡堂洗澡勃起好大一根| 国产又粗又猛又黄又爽无遮挡 | 久久99精品国产麻豆不卡| 无码国产一区二区三区四区| 久久精品国产亚洲AV嫖农村妇女| 69精品丰满人妻无码视频A片 | 137最大但人文艺术摄影| 无线视频WWW你会感谢我| 国内精品卡一卡二卡三| 性欧美大战久久久久久久| 公交车上拨开丁字裤进入电影| 伊人久99久女女视频精品免| 同桌上课脱裙子让我帮他自慰| 丁香花在线观看免费观看| 亚洲国产成人精品无码区二本| 护士奶头又白又大又好摸视频| 日本极品白嫩ASSPICS| 9999国产精品欧美久久久久久| 欧美精品一区二区三区在线观看| 色婷婷AV视频一二三区| 一本一道波多野结衣AV视频| 久无码久无码AV无码|